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克氏双糖铁琼脂原理和使用方法

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克氏双糖铁琼脂原理和使用方法

发布日期:2018-06-02 作者: 点击:

克氏双糖铁琼脂

克氏双糖铁琼脂的原理和使用方法。

克氏双糖铁琼脂常用于观察微生物发酵葡萄糖和乳糖的能力,只用KIA一种就可以把肠杆菌科细菌和其他科细菌区别出来。

克氏双糖铁琼脂成分中含有葡萄糖和乳糖,二者比例为 1:10, 指示剂为酚红,其在PH<6.8时变为黄色,而克氏双糖铁琼脂的PH为7.4,产少量的酸就可导致颜色变化。

生化原理:

斜面部分暴露于空气中,为有氧环境。而下部与空气隔绝是相对厌氧的环境。因此配克氏双糖铁琼脂时,最重要的是斜面部分和管下部琼脂的长度,两者均为3cm,以保证两部分相对应的有氧或厌氧环境。

用针穿刺时,取单个菌落,穿刺至底部3-5mm处,然后在斜面上往复划线。放35度培养18-24小时。

观察结果:有三种类型

A、非发酵型:无碳氢化合物发酵,所以无酸产生,斜面上琼脂的肽降解产物是碱性物质导致斜面变红。这种类型的细菌称为非发酵型。

B、非乳糖发酵型:如果接种的是发酵葡萄糖不发酵乳糖的细菌,培养基内仅有0.1%葡萄糖可以产酸。开始阶段,培养8-12h时,产生的酸足以引起斜面和底部颜色变成黄色。在接下来的时间里,葡萄糖被完全消耗,斜面部分的细菌在有氧条件下开始氧化降解氨基酸,产生的胺类很快就中和斜面上存在的酸;到18-24h,整个斜面又转换成碱性PH,颜色有变成红色。深部(厌氧区域),氨基酸降解不足以中和形成的酸,培养基仍为黄色。

C、乳糖(蔗糖)发酵型

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