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  • 发布日期:2018/07/05
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DuRed(10.000 in Water)同GelRed一样 代替EB染料DuRed 核酸染料

DuRed(10.000 in Water)同GelRed一样 代替EB染料DuRed 核酸染料(10,000× 水溶液)DuRed核酸染料特点 ● 无毒性:DuRed 独特的油性和大分子量特点使其不能穿透细胞膜进入细胞内,艾姆斯氏试验结果也表明,该染料的诱变性远远小于EB。

● 灵敏度高:适用于各种大小片段的电泳染色,对核酸迁移的影响小于SYBR Green I。

● 稳定性高: 适用于使用微波或其它加热方法制备琼脂糖凝胶;室温下在酸或碱缓冲液中极其稳定,耐光性强。

● 信噪比高:样品荧光信号强,背景信号低。

● 操作简单:与 EB 一样,在预制胶和电泳过程中染料不降解;而电泳后染色过程也只需30 分钟且无需脱色或冲洗 ,即可直接用紫外凝胶透射仪观察。

● 适用范围广:可选择电泳前染色(胶染法)或电泳后染色(泡染法);适用于琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳;可用于 dsDNA、ssDNA 或 RNA 染色。

● 与EB有相同的光谱特性,无需改变滤光片及观察装置:标准的 EB 滤光片或 SYBR 滤光片都适用,使用与观察EB相同的普通紫外凝胶透射仪观察即可,300nm 紫外光附近可得到最佳激发。但是DuRed不能被488 nm氩离子激光器或相似波长的可见光完全激发,因此不推荐使用此类激发装置的成像系统。对于此类装置,我们推荐您使用DuGreen(Cat#S1006),它和SYBR Green I的光谱相似,灵敏度相当,但更加稳定。

DuRed使用方法简介 1.胶染法(用法同EB)(推荐方法)

(1) 制胶时加入DuRed 核酸染料(例如:每50mL 琼脂糖溶液中加入5μL DuRed 10,000× 储液,以此比例类推)。

(2) 按照常规方法进行电泳。

注意事项:

u 此方法染色染料用量相对较少。500 μL染料大约可以做100块 50mL的胶。

u 由于DuRed具有良好的热稳定性,可以在热的琼脂糖溶液中直接添加,而不需要等待溶液冷却。摇晃,振荡或者翻转以保证染料充分混匀。也可以选择将DuRed储液加到琼脂糖粉末和电泳缓冲液中,然后用微波炉或其他常用方式加热以制备琼脂糖凝胶。DuRed兼容所有常用的电泳缓冲溶液。

u 如果总是看到条带弥散或分离不理想,建议使用泡染法染色以确认问题是否与染料有关。如果染色后问题依旧存在,则说明问题与染料无关,请尝试:降低琼脂糖浓度;选用更长的凝胶;延长凝胶时间以保证边缘清晰;改进上样技巧或选择泡染法染色。

u 此方法不适合预制聚丙烯酰胺凝胶,对于聚丙烯酰胺凝胶请使用泡染法。

2.泡染法

(1) 按照常规方法进行电泳。

(2) 用H2O将DuRed 10,000× 储液稀释约3,300倍到0.1M NaCl中,制成3× 染色液。(例如将15μL DuRed 10,000× 储液和5mL 1M NaCl加到45mL H2O中)。

(3) 将凝胶小心地放入合适的容器中,如聚丙烯容器中。缓慢加入足量的3× 染色液浸没凝胶。室温振荡染色30min左右,最佳染色时间根据凝胶厚度以及琼脂糖浓度不同而略有不同。对于含3.5~10%丙烯酰胺的凝胶,染色时间通常介于30min到1h,并随丙烯酰胺含量增加而延长。

注意事项:

u 用泡染法染色时,染料用量较多。单次使用的染色液可重复使用3次左右。

u 3×DuRed染色液可以大量制备,在室温下避光保存直至用完。

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